ПЦР на гепатит В: специфика метода

Одной из самых серьезных патологий в 21 веке стала инфекция, вызываемая вирусом гепатита В. В национальный календарный план прививок была включена вакцина, которая защищает человека от болезни сразу при рождении.

Однако количество людей, страдающих от последствий попадания в организм опасного микроорганизма, исчисляется миллионами. Вирус легко передается при незащищенном половом контакте, а также с микрочастичками крови. Поэтому исследование ПЦР на гепатит В становится особенно актуальным распространенности вируса.

Показания к исследованию

Методика не является скрининговой, она применяется по определенным клиническим показаниям. Для массовой диагностики обычно используется исследование сыворотки крови на австралийский антиген. Тем не менее, довольно большому числу людей ежегодно требуется проведение ПЦР-диагностики гепатита В.

Показаниями к проведению исследования служат:

• положительный тест HBsAg – наличие антигенов к вирусному гепатиту,
• острая инфекция, вызванная вирусом,
• количественное определение вирусной нагрузки,
• контроль эффективности проводимой терапии,
• оценка перспектив терапевтической тактики.

Таким образом, главным показанием для проведения ПЦР является наличие вирусного гепатита В, выявленного другим методом.

Однако в ряде ситуаций классический скрининг на австралийский антиген не дает точной уверенности в наличии заболевания. Определенное количество времени вирус уже находится в крови, но иммунная система еще не достаточно активно на него реагирует. Поэтому метод ПЦР используется при различных патологических состояниях.

Наиболее актуальны следующие клинические показания для проведения ПЦР на гепатит В:

1. желтуха неясного происхождения,
2. повышение аминотрансфераз,
3. длительный субфебрилитет,
4. низкий статус иммунитета,
5. выраженные изменения в печени, выявленные при УЗИ,
6. дифференциальная диагностика между гепатитами,
7. длительный диспепсический синдром.

Во всех клинических ситуациях изначально проводится диагностика с определением антигенов к вирусу гепатита В. Но при сомнительных результатах при наличии явных симптомов, не укладывающихся в рамки конкретного заболевания, выполняется ПЦР-исследование.

Суть ПЦР диагностики

ПЦР при гепатите В представляет собой количественное или качественное определение ДНК в сыворотке крови. Суть полимеразно-цепной реакции заключается в многократном увеличении фрагментов генетического материала вируса в биологической пробе.

В итоге даже при незначительном количестве микроорганизма в теле человека получаются точные положительные результаты. Достоверность диагностики – 98%, что дает практически полную гарантию точности исследования.

Биологическим материалом служит венозная кровь, очищенные лимфоцитарные клетки или биоптат печени. Последний вариант можно получить во время операции, если выявляются серьезные изменения органа без явной клинической картины.

Продолжительность проведения ПЦР – не более 1 суток, обычно реакция занимает около 4 часов. Противопоказаний исследование не имеет, за исключением отказа пациента от проведения диагностики.

Подготовка и этапы проведения анализа

Наличие клинических показаний нивелирует необходимость специально готовиться к сдаче анализа. Чтобы исключить искажение результата исследования, рекомендуется соблюдать общие правила забора сыворотки крови. Подготовка включает:

• взятие крови натощак – утром нежелательно употреблять пищу,
• исключение приема алкогольных напитков за 3 дня до проведения анализа,
• утром не курить,
• не употреблять жирную пищу за 36 часов до анализа, иначе результат ПЦР будет неинформативным,
• сдавать кровь в первой половине дня.

Все нюансы подготовки носят исключительно рекомендательный характер. Никаких противопоказаний для проведения полимеразно-цепной реакции на гепатит В не существует. При острой необходимости исследование выполняется в любой момент.

Ниже рассмотрены этапы ПЦР-диагностики с учетом времени, затраченного на выполнение манипуляций:

1. Взятие биологического материала. В 98% случаев исследуется сыворотка крови. В этом случае первый этап взятия образца на анализ занимает не более 30 минут. Кровь берется путем пункции вены.
2. Доставка материала в лабораторию. Кровь закачивается в специальную пробирку без консерванта, если исследование будет выполняться в этот же день. Транспортировка обычно занимает не более 3 часов.
3. Постановка ПЦР пробы на гепатит В. Выполняется в молекулярно-биологической лаборатории. В специальную емкость добавляют обогатительную смесь, с помощью которой определяются элементы ДНК вируса. Занимает обычно 4 часа.
4. Интерпретация результатов врачом-лаборантом. Анализ полученных при исследовании данных. Обычно занимает не более 2 часов.
5. Выдача заключения.

В крупных лабораториях, где ПЦР проводят ежедневно, все этапы диагностики занимают не более 1 суток. В обычных клиниках ПЦР на гепатит В часто проводят 1 или 2 раза в неделю для экономии реактивов. В этом случае время до получения результатов исследования резко увеличивается.

Если диагноз ранее не подтвержден, то абсолютных показаний к проведению ПЦР не будет. Это означает, что выполнять доступ через центральную вену нецелесообразно, так как полимеразно-цепная реакция на гепатит В не является скрининговой.

При наличии абсолютных показаний, связанных с необходимостью контроля виремии (количества вируса в крови), проводится пункция центральной вены и забор материала из сложного доступа. Такой метод взятия крови требует анестезии и наблюдения в течение суток из-за риска возможных осложнений.

Виды ПЦР-диагностики

Существует два варианта исследования биологического материала человека с помощью полимеразно-цепной реакции – качественный и количественный. Они различаются только на этапах интерпретации результатов.

При качественном анализе устанавливается лишь сам факт наличия вируса в организме человека. Результат будет выглядеть только одной фразой – положительный или отрицательный.

Метод хорош для раннего выявления вируса при инкубационном периоде, когда классический скрининг еще не дает точных данных о наличии антител. Применяется он и в клинической практике для разрешения сомнений при дифференциальной диагностике различных заболеваний.

Количественный анализ ПЦР на гепатит В подразумевает получение точных данных о виремии. Врач-лаборант считает количество копий вируса с целью определения гепатитной нагрузки. Это необходимо для оценки проводимого противовирусного лечения.

Если после назначения терапии количество копий вируса увеличивается, то требуется коррекция применяемых препаратов. Анализ важен при оценке прогрессирования заболевания. Чем больше копий вируса будет в крови в динамике болезни, тем злокачественнее и опаснее протекает поражение печени. При остром гепатите В уровень виремии сказывается на прогнозе хронизации заболевания.

Расшифровка результатов

При качественном методе ПЦР при гепатите В результат выводится путем установления самого факта наличия вируса в биологическом материале. Если микроорганизм обнаружен, то выдается заключение о положительной полимеразно-цепной реакции. Это означает, что человек или болен, или является носителем.

Качественное исследование проще, так как не требует подсчета копий вируса. Интерпретировать результаты такого исследования может лаборант без вмешательства врача. Поэтому методика часто используется в провинциальных регионах с дефицитом профессиональных кадров.

Количественное определение вируса подразумевает, что в отчете по ПЦР-диагностике будет отражен не только сам факт наличия инфекции, но и количество копий микроорганизма. Методика требует обязательного вмешательства врача, поэтому проводится только в крупных лабораториях.

Ниже рассмотрены основные варианты результатов количественного анализа:

• Копии отсутствуют , результат отрицательный. Такой вариант возможен, если пациент здоров или виремия меньше 20 МЕ/мл, то есть ниже диагностических возможностей реактива. Если ранее гепатит В определялся, то такой исход свидетельствует о высокой эффективности лечения.
• Менее 10*2 копий. Благоприятный результат, свидетельствующий о низкой виремии. Болезнь существует, но процесс лечения успешен, а при остром гепатите вероятность хронизации очень низкая.
• От 10*2 до 10*8 копий. Средний результат. Его следует интерпретировать в зависимости от предыдущих результатов. Если ранее анализ не выполнялся, то такой результат свидетельствует о стремительном прогрессировании болезни, которая требует немедленного лечения. Если в прошлых пробах количество вируса было больше, то лечение идет со средней эффективностью.
• Более 10*8 копий. Это самый неблагоприятный вариант. Свидетельствует о быстром прогрессировании болезни, неэффективности лечебных мероприятий и высокой вероятности хронизации при остром гепатите.

Выданный результат ПЦР на гепатит В не предназначен для самого пациента. Он нужен только лечащему врачу, который оптимально интерпретирует данные, исходя из клинических соображений. Поэтому даже при отрицательном ответе из лаборатории необходимо обязательно проконсультироваться с доктором.

При высокой виремии откладывать визит к врачу нельзя. Требуется немедленная коррекция лечения, так как от этого зависит жизнь больного.

Таким образом, ПЦР на гепатит В является важнейшим анализом для оценки течения заболевания. Хотя метод не скрининговый, он достаточно часто используется в клинической практике. Для полноценной интерпретации исследования лучше выполнять количественный анализ. В каждом случае после получения ответа из лаборатории требуется обязательная консультация специалиста.

Имеются противопоказания. Необходимо проконсультироваться со специалистом.